Slå på spektrometer og null det ved å sette destillert vann i en cuvet og kjører det som en prøve . Ulike spektrometre vil ha litt annen programvare eller hjelp av drift, men hver bør komme med klare instruksjoner for hvordan å kalibrere med en blank prøve av destillert vann.
2
Fyll en cuvet med den første prøven av kjent konsentrasjon. Kjør prøven for å bestemme absorbansen verdi. Spill prøven nummer, allerede kjent konsentrasjon og absorbans lesing. For eksempel kan Prøve 1 har en konsentrasjon på 0,05 mol per liter og en absorbans på 400
3
Fyll en frisk cuvet med neste prøve og kjøre det gjennom spektrometeret . Noter prøvenummer , konsentrasjon og absorbans . For eksempel kan Prøve 2 har en konsentrasjon på 0,5 mol pr liter og en absorbans på 4,000 . Gjør det samme for tredje prøven. For dette eksemplet anta at Prøve 3 har en konsentrasjon på 5 føflekker per liter og en absorbans på 40.000 .
4
Bruk Beer- Lambert lov å beregne molar absorptivity koeffisient for hver prøve . Denne ligning sier at absorbans er lik konsentrasjonen av oppløsningen multiplisert med banelengden ( bredden på cuvet ) multiplisert med den molare absorpsjonsevne koeffisient : A = EBC , hvor e er den molare absorpsjonsevne koeffisient , er b banelengden , c er konsentrasjonen , og A er absorbansen . Multipliser veilengden i centimeter ved konsentrasjon , og deretter dele absorbansen av det nummeret. For dette eksemplet anta at cuvet er 1 centimeter bred. For Prøve 1 , multiplisere en av 0,05 , noe som tilsvarer 0,05. Dividere 400 med 0,05 for en molar absorptivity koeffisient på 8,000.
5
Utfør den samme beregning for de andre prøvene . For prøve 2 , multiplisere med 0,5 1 for et resultat på 0,5. Fordel 4000 med 0,5 for å gi en molar absorpsjonsevne konstant på 8000 . Den samme beregning for Prøve 3 gir også et resultat av 8,000. I virkelige laboratorieforhold , vil hver prøve produsere en litt annen konstant. Spill hver enkelt.
6
Gjennomsnittlig alle de beregnede molare absorptivity konstanter ved å legge dem sammen og dele totalt med antall kjente prøver du kjørte . Du kan nå bruke den resulterende molar absorptivity koeffisient å estimere konsentrasjonen av ukjente prøver .