Hvordan redusere ikke-spesifikk binding til beholdere

I en immunanalyse bindingskapasitet i en container eller i mikroplatebrønnerer høyere enn mengden av protein som er lagt inn i beholderen , eller brønner. For å redusere eller forhindre at antistoffer eller andre typer av proteiner og molekyler fra å absorbere til beholderen , eller brønner , må analysen vaskes med en egnet buffer , og en spesifikk blokkerende reagens må legges til. Den type buffer og blokkerer reagens velges, avhenger av hvilken type eksperimentelle assay.Things du trenger arkiv Plate brønner
Buffer løsning
Blokkering reagens
Pipette
Antigen
Antistoff

Vis MoreInstructions
en

Coat platen brønner med antigenet . Bruk en antigen fortynning . Rene oppløsninger av antigen er ikke nødvendig siden bare rundt 3 prosent av proteinet i prøven er målproteinet . Ved fortynning sikre at prøvene inneholder antigenet i en konsentrasjon som er innenfor rekkevidden av antistoffet. Pipetter antigen fortynning løsning ned platebrønnene. Noen av platene kan være forhåndsbelagtmed antigen. Les instruksjonene som følger med platebrønnene.
To

Dekk platene med en selvklebende plast og inkuberes over natten . Vask platene med bufferløsninger , slik som Tris- bufret saltvann eller fosfat -bufret saltvann . For å vaske, skylle platene ved hjelp av en klemme flaske fylt med bufferoppløsningen over en laboratorie vask. Pat platene med et papirhåndklefor å fjerne eventuelle gjenværende dråper av bufferløsning .
3

redusere ikke-spesifikk binding av proteiner og molekyler ved hjelp av en blokkeringsbuffereller reagens , slik som en detergent blocker , tørrmelkeller bovin serum . Den type blokkerende reagens som anvendes vil være avhengig av analysen. Til den blokkerende reagens til brønnene ved hjelp av en pipette. Dekk platen igjen med lim plast og inkuberes over natten .
4

Re - Vask platen brønnene igjen ved hjelp av en bufferløsning . Denne fremgangsmåten vil redusere mengden av ikke-spesifikk binding som kan forekomme i de platebrønnerfør tilsetning av nødvendige antistoff -løsning for inngrepet. I tillegg kan de blokkeringsmidler bidra til å redusere bakgrunnsfarger i resultatene av analysene .