Hvordan lage en Bis - Tris -buffer Transfer

Koblingen av bis -tris er viktig i biokjemi grunn av sin evne til å fungere som et zwitterion , som har en positiv og negativ ion på molekylet . Den kan virke som en buffer i området ved pH 7,6 . Det er lagt til gelene som brukes i elektroforese for å bidra til å holde molekylene i løsningen, og hjelpemidler for separasjon av molekyler . Overføringsbufferefjerne molekyler fra gel plater av elektroforese analyse og overføre dem til membraner for western blotting . Hver produsent av elektroforese utstyr rapporter litt forskjellige oppskrifter for å lage en overføring buffer , men følgende er for overføring buffer brukes med NuPAGE systemer på ikke- reduserte samples.Things du trenger
bicin
Bis -tris
EDTA
250 ml begerglass
Metanol
1000 ml flaske
ultrarent vann på
Vis flere instruksjoner
en

Forbered ingrediensene til buffer ved veiing ut de mengder av hver komponent for en analytisk balanse. De tre tørre komponenter for en overføring buffer er bicin , bis -tris og EDTA . Vekt ut 4,08 gm bicin , 5,23 gm av bis - tris og 0,29 gm av EDTA på enkelte veier papirer .
To

Legg disse komponentene til en 250 ml begerglass . Oppløs disse komponentene med 100 ml metanol. Rør til faste stoffer oppløses .
3

Overfør oppløste komponenter til en 100 ml flaske og vaske beger med ultrarent vann for å sikre overføring av alle komponentene .
4

fylle resten av volumet til en liter med ultrarent vann . Tilsett vann i porsjoner som tillater tilstrekkelig blanding mellom hver tilsetning . Bland innholdet for å oppnå en jevn konsentrasjon .