Slik feilsøker en Primer Dimer

Den polymerase chain reaction , eller PCR , er en teknikk i molekylærbiologi brukes til å forsterke bestemte regioner av DNA. PCR er avhengig av primere , som er korte DNA-tråder som er komplementære og som er spesifikke for DNA av interesse. Mens primere generelt vil binde seg til DNA Matching deres rekkefølge , de av og til vil binde seg til og forsterke hverandre , forårsaker fenomenet kjent som en primer dimer.Things du trenger arkiv Primer sekvenser på
Vis flere instruksjoner

1

Undersøk GC innhold ( antall G og C -er) i din primer sekvens . GC binding er sterkere enn ved liming på grunn av den ytterligere hydrogenbinding mellom guanin og cytosin . Optimal bonding er minst 50 prosent GC innhold.
2

Undersøk annealing temperaturen på din reaksjon . Lave annealing temperaturer, generelt definert som 55 C eller lavere , kan forårsake ikke-spesifikk binding av primeren , som kan føre til primer -dimerer i tillegg til forsterkning av genomiske uriktige seksjoner .
3

dobbel -Innsjekking mengden og konsentrasjonen av primere du lagt til PCR. Et overskudd av primere , vanligvis mer enn 75 picomol , kan forårsake primer dimer , også.