Slik Ekstraher DNA fra anlegg blader

er Plant organisk materiale som består av flere celler , som hver inneholder det DNA som inneholder instruksjoner for vekst og funksjon. Forskere kan ønske å studere deler av eller hele arvestoffet til stede i cellene , og så må sikkert trekke ut DNA fra byggematerialet og celle maskiner som omgir it.Things du trenger arkiv 2 gram blader
morter
Sentrifuger
vannbad
Balance
cheesecloth
Seks 15ml Sentrifugerør
En 1,5 ml Eppendorf rør
100ml CTAB utvinning buffer
2ml Beta - mercaptoethanol
7ml 24: 1 kloroform : isoamylalkohol blandingen
50 mikroliter av RNAse A i en konsentrasjon på 10 mg /ml
Pipetter
6 ml isopropanol
2 ml 70% etanol
1 ml Sterilt avionisert vann

Vis flere instruksjoner
1

Fyll vannbad til det anbefalte nivået med vann, som varierer med hver produsentens spesifikasjoner , og slå den på. Sett vannbad til 65 grader Celsius , og la den komme opp til temperatur . Plasser beholderen isopropanol på is. Sett sentrifuge ved 3000 omdreininger per minutt ved en temperatur på 20 grader Celsius.
2

Vei 2 g blader på en balanse og plassere dem i en morter . Tilsett nok beta -mercaptoethanol via pipette til en beholder for utvinning buffer slik at sluttproduktet består av en til to prosent av beta - merkaptoetanol . For eksempel , hvis du har et volum på buffer som måler ca 100 ml , deretter tilsett 2 ml beta - mercaptoethanol til beholderen og bland godt .
3

Pipetter 7 ml utvinning buffer inn i mørtel . Knuse blandingen til en homogen væske med en pistill .
4

Brett et stykke osteklede over for å danne fire lag . Sil og klem væsken gjennom lagene inn i en 15 - ml sentrifugerør.
5

Plasser røret i vannbad for 30to 60 min ter . Virvle røret for å blande innholdet hvert kvarter . Tillat røret kjøles ned til romtemperatur etter den fullstendige tidsperioden er ute.
6

Top opp røret med kloroform og isoamylalkohol blandingen (dette inneholder 24 deler kloroform til en del isoamylalkohol ), slik at røret inneholder omtrent halvparten av prøven , og halvparten av den nye væsketilsetningen . Cap røret og snu den opp ned noen ganger sakte slik væskeblandinger .
7

Sett røret i sentrifugen og la den snurre i 10 minutter.
8

Plass 50 ml RNAse A inn i et nytt sentrifugerør. Pipetter supernatanten ( det klare lag på toppen av røret over et hvitt lag av rusk) i det første røret og flytter den til det andre røret . Cap røret og snu den et par ganger for å blande innholdet sammen. Hold røret ved romtemperatur i en time.
9

Utfør trinn 6 og 7 om igjen to ganger , slik at du har en klar prøverør . Deretter pipettere opp til 9 ml av den klare væske fra det endelige røret inn i et nytt rør. Tilsett 6 ml isopropanol og invertere rørene 10 ganger på en skånsom måte slik at DNA faller ut av oppløsningen , og inn i en fast form. Deretter sentrifuger røret i 10 minutter, noe som skal skape en pellet av DNA i bunnen av røret .
10

Hell av væsken i røret, slik at pelleten gjenstår. Pipette i 2 ml 70% etanol og stedet tilbake i sentrifugen i fem minutter . Hell av flytende delen igjen . Bruk en steril pipette tips å plukke opp pellet og flytte den til et sterilt 1,5 ml Eppendorf rør. Pipette i 200 mikroliter sterilt avionisert vann og la DNA oppløses helt i væsken , noe som kan ta over natten. Prøven er deretter klar for analyse.