Hvordan identifisere Gram Positive Rods

Siden 1880-tallet , forblir Gram flekken test en viktig metode for bakteriell identifikasjon og klassifisering . Mikrobiologer ofte utføre Gram test som første skritt i å identifisere bestemte typer stavformede bakterier fra slekten Bacillus . Gram farging er oppkalt etter sin oppfinner , dansk bakteriologen Hans Christian Gram . Metoden arbeider på grunn av en forskjell i gram positive og gram negative bakterielle cellevegg fysiologi. Visse gram positive staver føre til alvorlige sykdommer som miltbrann og tetanus.Things du trenger arkiv Lab klær arkiv Hansker
Shoe gulvbelegg
Trykkoker
Bakterier koloni
Agar
Petri retter
Vann
Inoculation sløyfe
Glass lysbilde
Metanol
bunsenbrenner
Krystallfiolett flekken
Jod flekken reagens
Decolorizer
safranin
Fuchsin løsning
Absorberende papir
mikroskop på
Vis flere instruksjoner
en

Sikre bruk av en ren , steril laboratoriet plass til å gjennomføre Gram flekken test. Bruk rene lab klær og sko gulvbelegg for å hindre forurensning . Bruk hansker og maske ved håndtering av bakteriekulturer . Isolere en koloni av basiller for din test og vokser det ut på næringsrik agar i petriskåler . Sterilisere petriskåler og agar med en trykkoker før bruk .
To

Tilsett noen dråper rent vann til kultur parabolen. Fordel den jevnt over agar . Dra en innsprøytning sløyfe lett over agar overflate. Overfør prøven på et rent glass lysbilde og smøre det jevnt i sirkulært område på størrelse med en krone . Hold størrelsen på utvalget minimal; du bør være knapt i stand til å se det med det blotte øye .
3

Påfør 95 prosent metanol over glide smøre for to minutter å fikse cellene og forhindrer forvrengning av deres morfologi . Air tørke lysbildet eller varme den forsiktig over en lav Bunsen brenner flammen . Flytt glide back- og-tilbake for å varme jevnt og unngå lokale hot spots . Påfør varmen jevnt og konsekvent . Unngå å ta raset ut av flammen før du er ferdig med å varme den .
4

Hell krystallfiolett flekken reagens over fast lysbilde. La det stå i 30 til 60 sekunder . Vask flekken med vann fra springen i noen få sekunder . Drenere overflødig vann fra raset . Dekk lysbilde med jod flekken reagens i 30 til 60 sekunder . Vask av jod med vann fra springen . Vipp sklie og tilsett noen dråper decolorizer . Bruk den til avrenning er ren . Vask raset .
5

Sug lysbildet med rosa -farget safranin mot flekker reagens for 30 sekunder . Du kan erstatte grunnleggende fuksin løsning for safranin . Forsiktig vaske raset og riste av overflødig vann . Blot den tørr med absorberende papir og deretter luft - tørke lysbildet . Undersøk forberedt skyve under et mikroskop utstyrt med en lyskilde . Se etter og identifisere gram positive bakterier stenger med blå eller fiolett farge fra Gram flekken test .