Hvordan bruke Sanger Reagenser

er Sanger reagens brukes til å bestemme rekkefølgen av aminosyrer som utgjør et peptid . Reagensen vil låsen på - eller tag - aminosyren i enden av et peptid -kjeden, også kjent som N-enden . Peptidet kan deretter deles opp i stykker ( hydrolysert ), og de ​​individuelle aminosyrer undersøkt ved hjelp av forskjellige kromatografiske fremgangsmåter . Uansett hvilken aminosyre som bærer koden er den ene i enden . Sanger reagens er også kjent som dinitrofluorobenzene ( DNFB ) . Når den har låst inn på en aminosyre , er det referert til som en DNP - compound.Things du trenger
Laboratory skala arkiv Hansker arkivVerneBrillerarkiv Sentrifuger
Sentrifugerør
Pasteur pipetter
Destillert vann
4,2 % løsning av natrium bikarbonat
Sanger sin Reagens ( FDNB )
pH papir
Dietyleter
6M løsning av saltsyre
Aceton
Test tube på
Vis flere instruksjoner
en

Vei opp tre miligrams av peptid på en skala . Plasser den i et sentrifugerør . Til omtrent 0,3 ml vann , 0,3 ml av Sanger største -reagens og 0,075 ml av natriumbikarbonat .
2

Tillat sentrifugerøret inkubere ved romtemperatur i en time. Under inkubasjonen ristes røret forsiktig for å hindre blandingen fra å separere . Kontroller pH-verdien av løsningen hvert 15. minutt, og pH-papir . PH bør holdes over ni . Hvis det begynner å slippe, legg en liten mengde natrium bikarbonat (ca. en dråpe med Pasteur pipette ) .
3

Etter inkubasjon , tilsett 1,5 ml vann, og en lik mengde eter. Tillat løsningen å separere i lag . Du må kanskje sentrifuger blandingen for å skille det . Fjern eterlaget (den øverste , gule laget ) med en pipette og kast den.
4

Juster pH ned til 1,0 ved å sakte tilsette saltsyre . Legg en liten bit av syre gangen , rør forsiktig , så sjekk pH med pH-papir . Til sammen , bør den kreve ca 0,15 ml syre. Hvis pH-verdien går under 1,0 , legg en liten mengde ( ikke mer enn en dråpe ) natrium bikarbonat .
5

Legg 3 ml eter . Tillat blandingen å skille . Nå er det øverste laget ( gult , eterlaget ) inneholder DNP- forbindelsen . Ved hjelp av en pipette , forsiktig trekke ut dette laget , og overføre det til et rent reagensrør. Sett testrøret til side og la væsken til å fordampe , etterlater en tørr , gul solid .
6

Vask solid med aceton . Legg 0,3 mililiters aceton , rør forsiktig og trekke ut væsken med en pipette . Legg 0,75 mililiters av syre til prøverør . Din peptid er nå merket og klar til å bli hydrolysert og analysert med kromatografi metode du velger .